ChineseMedicine Feb．2009V01．11No．2 2009年2月第11卷第2期 中国现代中药Modern 工艺研究 积雪草总皂苷闪式提取(STE)工艺研究△ 汪中博1，赵余庆2+ 沈阳 (1．辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032；2．沈阳药科大学，辽宁 110016) [摘要]目的：研究和优选积雪草中活性成分积雪草总皂苷的提取和纯化工艺。方法：以积雪草总皂苷的含量 为测定指标，采用分光光度法测定和比较不同的提取和纯化方法所得积雪草总皂苷的含量。结果：以积雪草总皂苷 含量为考察指标，优选出积雪草最佳提取工艺为75％乙醇。闪式提取法提取3次，每次5rain。结论：闪式提取法得 到的总皂苷的含量最高。 [关键词]积雪草；积雪草总皂苷；闪式提取；树脂；纯化 asiatica 积雪草为伞形科植物积雪草Centella 仪器有限公司)；旋转蒸发仪RE-52A(上海亚荣盛华 (L．)Urb．的干燥全草，性苦，辛、寒，具有清热仪器厂)；恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公 利湿、解毒消肿的功能，大多数都用在湿热黄疸、中暑 腹泻、砂淋血淋、痈肿疮毒、跌扑损伤…。积雪草 器有限公司)；微波炉wP700(佛山市顺德区格兰仕 又称落得打、半边钱、崩大碗、马蹄草等，广泛分 微波炉电器有限公司)。 布于长江流域以南各地，资源丰富。全草入药，常 1．2试药 年可采。积雪草在许多国家的医药领域中的应用已 积雪草苷对照品(实验室自制，含量98．O％)； 有几千年历史。其始载于《神农本草经》，列为中 所用试剂均为分析纯；D-101大孔吸附树脂(天津农 品。现代医学研究证明，积雪草提取物可有效地促 进皮肤损伤局部胶原合成代谢，并在皮肤损伤后的 脂(河北沧州宝恩化工)；积雪草全草(购自陕西慧 组织修复方面有重要的作用【2J。近年来研究之后发现积 科植物开发有限公司)，经辽宁中医药大学翟延君教 雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制肿瘤细胞增 授鉴定为正品。 生等作用¨j。 1．3样品处理 国内外对积雪草总皂苷的提取工艺主要以传统 将积雪草全草粉碎成2mm大小的粉末。 的煎煮法和回流法为主【4j，纯化方法见有壳聚糖絮 2方法与结果 凝法∞J、树脂吸附法、氧化镁和活性炭脱色等研究 2．1提取方法与结果 报道№]。近些年，中药提取纯化关键技术的研究已 2．1．1积雪草总皂苷的提取工艺考察根据文献报 成为热点。本文报道应用一种新的提取技术——闪 道[3’5引，本实验选用乙醇为提取介质，进而对不同 式提取法与微波和超声波及乙醇回流法进行积雪草 提取办法来进行考察。 总皂苷提取工艺的比较研究。结果证明，积雪草经 2．1．1．1闪式提取器提取隋1精密称取积雪草粉末 闪式提取和树脂纯化后，总皂苷的含量为最高，所 209。加lo倍量75％乙醇，闪式连续提取3次，每 用时间也最少，是一种提取效率高、生产所带来的成本低的 次5rain合并提取液，抽滤，减压回收干燥，备用。 积雪草总皂苷的提纯方法。 2．1．1．2乙醇回流提取口1精密称取积雪草粉末209 l仪器和试药 1．1仪器 提取3次，每次2h，合并提取液，抽滤，减压回收 闪式提取器JHBE-50S(河南金鼐科技发展有限干燥，备用。 公司)；精密电子天平BS·124S(德国赛多利斯公2．1．1．3微波提取【61精密称取积雪草粉末209置 司)；紫外可见分光光度计UV-2800AH(尤尼柯上海 △【基金项目】 辽宁省天然药物现代分离与工业化制备工程技术探讨研究中．t：,(2006．19．10) 【通讯作者] ‘赵余庆，Tel：024E-mail： ·36· 万方数据 ChineseMedicine Feb．2009VoL11 No．2 2009年2月第11卷第2期 中国现代中药Modern 2450MHz微波条件下提取30min，连续提取3次，种型号大孔树脂，对积雪草闪式提取物依次用水和 合并提取液，抽滤，减压回收干燥，备用。 75％乙醇洗脱，乙醇洗脱液减压回收，浓缩干燥， 2．1．1．4超声波提取【31精密称取积雪草粉末209置 得到3种不相同的型号大孔树脂纯化后的总皂苷。 250mL锥形瓶中，加10倍量75％乙醇，在40℃、 量瓶中，加90％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精 50Hz超声提取lh，连续提取3次，合并提取液，抽 滤，减压回收干燥，备用。 密量取1mL置15mL具塞试管中，挥干乙醇，加入 2．1．2对照品溶液的制备和标准曲线mL，测定吸光度，利用标准曲线计算出积 称取干燥至恒重的积雪草苷对照品25．80rag，于 25mL容量瓶中，加乙醇溶解稀释至刻度，摇匀，制雪草总皂苷的含量。见表2。 成lmL约含1．032mg的积雪草苷对照品溶液。 表2 3种纯化工艺考察 分别精密量取对照品溶液0，0．5，1．0，1．5， 2．0，2．5mL，置100mL容量瓶中，置80℃水浴中挥 尽溶剂，放冷，加硫酸2mL，摇匀，置80℃水浴中 加热30min，放冷，加乙醇稀释至刻度，摇匀，照分 光光度法，以第一管为空白，在287nm波长处测定 2．2．2溶剂萃取积雪草药材40℃烘干，粉碎成粗 吸光度。以吸光度(y)为纵坐标，浓度(X：P,g· 粉，精密称取积雪草原药材粗粉59，加100mL溶 mL。1)为横坐标作标准曲线，得回归方程Y= 剂，闪式提取法提取，过滤，滤液减压回收溶剂至 67．721X一2．607 5，r=0．999 6。浓度在5—25p,g·干，加水溶解，用正丁醇萃取3次，每次50mL，合 mL。1与吸光度呈线性关系。 并萃取液，回收正丁醇层至于，用乙醇溶解并稀释 2．1．3提取方法比较分别按照以上4种方法提取，至25mL容量瓶中，过滤，滤液摇匀，制得样品溶 精密称取积雪草提取物10mg置10mL容量瓶中，加液。测定吸光度为0．201，利用标准曲线％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密称取积雪 草丁醇提取物中总皂苷含量为38．09％。 草总皂苷10mg置10mL容量瓶中，加90％乙醇溶解 并稀释至刻度，摇匀。精密量取1mL置15mL具塞纯化后的积雪草总皂苷含量最高，所得醇洗液颜色 试管中，挥干乙醇，加入2mL浓硫酸，80℃水浴加也最浅，能够准确的看出，该办法能够有效地把积雪草苷 与色素和杂质最大限度分离。 热30min，然后加入乙醇，定容至10mL，测定吸光 度，利用标准曲线计算出积雪草总皂苷的含量。见 3讨论 表1。 微波与超声提取法提取积雪草总皂苷分别需要 表1 4种提取工艺的考察 含量为3．26％，3．42％，与文献旧’60报道相近，是 比较好的积雪草总皂苷提取方法。 闪式提取法虽然出膏率(6．35)与微波和超声提 取法相近，但皂苷含量(4．20％)显著增加，提取时 间(5rain)明显减少，节约能源。从提取时间、出膏 率、皂苷含量3个方面考虑，闪式提取法为积 2．1．4结果从上述实验能够准确的看出，闪式提取的出 雪草总皂苷的最佳提取方法。 膏率与超声和微波的提取率相差不大，但是浸膏中 闪式提取器是一种用于植物软、硬材料快速提 积雪草总皂苷含量却比其他3种提取方法高出很多。 取的新型提取器。依靠高速机械剪切力和超动分子 闪式提取作为一种新的提取工艺，具有省时，节能， 渗滤技术，在室温及溶剂存在下数秒钟内把植物的 含量高等特点，因此，闪式提取是最佳的积雪草提 根、茎、叶、花、果实等物料破碎至细微颗粒，并 取工艺。 使有效成分迅速达到组织内外平衡，通过过滤达到 2．2纯化方法与结果 提取之目的。该仪器能最大限度保护植物有效成分， 2．2．1不相同的型号树脂的纯化工艺考察∞’本实验根 不会受热破坏，溶剂用量小，提取时间短，效率高， 3 节约能源。旺圈 据文献报道，选用了D．101、HPD一100、HPD-300 ·37· 万方数据 ChineseMedicine Feb．2009VoL11 No．2 2009年2月第11卷第2期 中国现代中药Modem 参考文献 [5]卢茂芳，李若存，彭新君，等．积雪草提取纯化工艺的研究 ．[1]国家药典委员会．中国药典(一部)[S]．北京：化学工业 [J]．湖南中医药大学学报，2007，27(1)：16·19． 出版社，2005：199-200． [6]陈瑶，韩婷，秦路平，等．正交设计法优选积雪草总苷的提 [2]陆兴毅．uV测定积雪草总苷的含量[J]．现代食品与药品取工艺[J]．中药材，2003，26(3)：204-205． 杂志，2006，12(2)：15·16． [7]黄云虹，张胜华，甄瑞贤，等．积雪草甙诱导肿瘤细胞凋亡 [3]陈怡，高文远，于泉林，等．田口试验设计法优选积雪草 及增强长春新碱的抗肿瘤作用[J]．癌症，2004，23(12)： 1599．1604． 提取工艺[J]．中国中药杂志，2007，32(16)： 1714．1716． [8]吴冬梅．闪式提取器在中药研究中的应用[J]．中国实验 [4]王保奎，翁东明，刘锡钧．积雪草甙的提取与分离[J]．海 方剂学杂志，2006，z2(7)：34．37． 峡药学，1996，8(4)：34． (收稿日期2008-07-23) StudiesOnthe TissueExtractionProcessthe of Total of Smashing Saponins CentellaAsiatica WangZhongb01，ZhaoYuqin92 TraditionalChinese l (1．Liaoning of Liaoning10032，China； Unive瑙ity Medicine，Shenyang Pharmaceutical 110016，China) 2．Shenyang University，ShenyangLiaoning and theextractionand methodoftotal inCentella [Abstract]Objective：Tostudy optimize purification saponins thecontentoftotal inCentellaasiatica asiatica．Methods：Determine UV．Results：Theextrac． saponins by optimum tion wereas fold min conditions each contentoftotal follows：1075％EtOH，3times，5 time．Conclution：The sapo． in ninsCenteHaasiaticawasthe tissueextraction． highestbysmashing inCenteHa Tissue [Keywords]Centellaasiatica；Totalsaponins asiatica；Smashing fica矗on (上接第23页) 2．1．8加样回收率试验分取上述样品粉末0．19共的含量测定办法来进行测定，结果薯蓣皂苷元在栽培 5份，精密称定，精密加入0．198 4mg·mL一薯蓣皂品和野生品中的含量分别为0．63％，0．60％。 苷对照品溶液3mL，依2．1．1方法制备供试品溶液， 3讨论 再照2．1．3方法测定，结果平均回收率为97．77％， 七叶一枝花野生资源日渐枯竭，经过多年的移 RSD=2．24％。 植栽培，证实七叶一枝花野生移栽是完全可行的， 2．2品比试验 特别是在南方一些具有竹林区的地方，在发展毛竹 2．2．1栽培品与野生品生药收获量比较通过对栽 生产的同时，立体发展栽培七叶一枝花是增加农民 培7年生的栽培七叶一枝花和野生8年生植株进行 收入的重要有效途径，移栽的七叶一枝花根茎经化 生物量抽样对比研究，结果见表l。 学成分分析，野生品和移栽品有效成分含量基本相 表1七叶一枝花野生品与栽培品生物量比较 同。噬圈 参考文献 [1]边洪荣，李小娜，王会教．重楼的研究及应用进展[J]．中 从表l中能够准确的看出栽培品年干重生长量比野生 药材，2002，25(3)：218-220． 品要高出1．29，高出率达57％，由此可见栽培是促[2]王诗云，赵子恩。彭辅木，等．华中珍稀濒危植物及其保 存(第一册)[M]．北京：科学出版社，1995，139． 进七叶一枝花迅速提高产量的可行方法。 【3]杨骁，张振秋．重楼中总皂苷的含量测定[J]．中华中医 2．2．2有效成分比较分析在收获的栽培品和野生 药学刊，2007，25(11)：2420-2422． 品中采取随机抽样的方法，各抽出3个样品，对其 主要成分薯蓣皂苷元作对比。依上述薯蓣皂苷元 (收稿日期2008-08-28) ·38· 万方数据 积雪草总皂苷闪式提取(STE)工艺研究 作者： 汪中博， 赵余庆， Wang Zhongbo， Zhao Yuqing 作者单位： 汪中博,Wang Zhongbo(辽宁中医药大学,辽宁,沈阳,110032)， 赵余庆,Zhao Yuqing(沈阳药 科大学,辽宁,沈阳,110016) 刊名： 中国现代中药 英文刊名： MODERN CHINESE MEDICINE 年，卷(期)： 2009,11(2) 被引用次数： 7次 参考文献(8条) 1.吴冬梅 闪式提取器在中药研究中的应用[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2006(07) 2.黄云虹;张胜华;甄瑞贤 积雪草甙诱导肿瘤细胞凋亡及增强长春新碱的抗肿瘤作用[期刊论文]-癌症 2004(12) 3.陈瑶;韩婷;秦路平 正交设计法优选积雪草总苷的提取工艺[期刊论文]-中药材 2003(03) 4.卢茂芳;李若存;彭新君 积雪草提取纯化工艺的研究[期刊论文]-湖南中医药大学学报 2007(01) 5.王保奎;翁东明;刘锡钧 积雪草甙的提取与分离 1996(04) 6.陈怡;高文远;于泉林 田口试验设计法优选积雪草提取工艺[期刊论文]-中国中药杂志 2007(16) 7.陆兴毅 UV测定积雪草总苷的含量 [期刊论文]-现代食品与药品杂志 2006(02) 8.国家药典委员会 中国药典(一部) 2005 本文读者也读过(10条) 1. 农贵生.万承俊.邹勇芳 积雪草总黄酮的超声波提取工艺研究[期刊论文]-中国中医药咨讯2010,02(1) 2. 侯文砚.沈宁.高仁孝.HOU Wen-yan.SHEN Ning.GAO Ren-xiao 积雪草提取工艺的研究[期刊论文]-应用化工 2011,40(4) 3. 张炜.Zhang Wei 积雪草总苷提取工艺和含量测定研究[期刊论文]-泸州医学院学报2008,31(5) 4. 卢茂芳.李若存.彭新君.湛扩.LU Mao-fang.LI Ruo-cun.PENG Xin-jun.ZHAN Kuo 积雪草提取纯化工艺的研究 [期刊论文]-湖南中医药大学学报2007,27(1) 5. 王荣.黎云祥.蔡凌云.高侠Rong.LI Yun-Xiang.CAI Ling-Yun.GAO Xia 积雪草总黄酮提取工艺和含量测 定研究[期刊论文]-光谱实验室2009,26(3) 6. 侯文砚 积雪草苷的提取与分离[学位论文] 7. 李阳春.孙静芸.姚新生 复方积雪草颗粒提取工艺研究[期刊论文]-中草药2003,34(10) 8. 张开莲.张炜 正交试验优化积雪草总苷提取工艺[期刊论文]-中国药房2008,19(21) 9. 程晓荣.赵晨晨.承伟 微波辅助提取积雪草总黄酮的工艺研究[期刊论文]-安徽农业科学2011,39(3) 10. 贾广韬 积雪草苷的提取、分享纯化与水解[学位论文]2010 引证文献(7条) 1.SUN Yan-ling.LIU Yan-ze.XIAO Han.WEI Ying-feng.ZHAO Yu-qing Smashing Tissue Extraction and GC Analysis of Active Fatty Acids from Oil Cake of Perilla Seeds [期刊论文]-中草药(英文版) 2011(1) 2.LIU Yan-ze.GAO Wen-qin.WANG Ji-wen.ZHANG Yu.ZHAO Yu-qing Smashing Tissue Extraction and HPLC Determination of Paclitaxel and 10-Deacetylbaccatin from Taxus x media [期刊论文]-中草药（英文版） 2011(3) 3.刘兆.荣永海.王志滨.荣龙 闪提技术提取罗汉果甜甙[期刊论文]-天然产物研究与开发 2011(3) 4.周康.刘延泽.王中博.李巍.赵余庆 积雪草苷的闪提工艺优选及不同提取方法的比较研究[期刊论文]-中国中药杂 志 2011(23) 5.韩冰.郑礼胜.刘向前.邹亲朋 苦杏仁中苦杏仁酶的闪式提取工艺研究[期刊论文]-现代药物与临床 2011(2) 6.王晓婧.孙伟.曾珂.区海燕.赵余庆 不同产地苦瓜中苦瓜皂苷的闪式提取及HPLC测定[期刊论文]-中草药 2011(12) 7.宋发军.杨芳.许德红.王德彬 野木瓜藤茎部位总皂苷闪式提取工艺[期刊论文]-中南民族大学学报（自然科学版 ） 2010(3) 本文链接：/Periodical_zyyjyxx200902013.aspx

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